良好移液操作与校准：它们如何影响实验结果

校准与操作技术：决定实验成败的两大因素

在生命科学研究和检测实验室里，移液是每天都会发生的基础操作。从学术实验室到遵循标准操作规程的检测实验室，移液器的状态与操作者的手法，都会直接影响最终数据。移液器性能取决于两方面：一是设备本身，需要保持良好的维护状态，定期检查是否仍满足既定规格；二是操作技术，使用者要不断打磨移液技巧，才能稳定发挥出最佳性能、拿到可靠数据。

「定期维护」和「操作技术」这两点都做到位，移液引入的不准确性会明显下降，无论什么应用场景，结果都更可靠。

校准对实验结果的量化影响

许多基因组学实验都包含 PCR 或 qPCR 环节，需要精确添加反应组分或制备标准曲线。大量文献表明，不仅要谨慎移液，保持移液器处于校准状态同样至关重要：

• 多项研究建议避免移取小于 2 µL 的体积，因为精准移液对 qPCR 实验的成功至关重要
• 建议专门留出一组专用移液器并定期校准
• 使用单支已校准移液器制备标准曲线，比使用两支移液器或未校准移液器的误差更小

用一个简单的计算就能看出移液误差的影响。假设用一支 10 µL 移液器在 5 µL 处操作，其机械准确度为 ±0.075 µL；如果 5 µL 里有 30,000 个拷贝，那么仅移液器本身（先不算操作者技术）固有的拷贝数变异就在 30,450 到 29,550 之间。这还是建立在移液器已良好校准、妥善维护的前提上。

操作技术对实验结果的量化影响

除移液器本身外，操作技术也是引入误差的重要来源。根据操作者熟练程度，技术因素可额外引入 ±2% 到 7% 的变异。这些误差在稀释系列中会不断累积，最终使标准曲线和检测结果产生显著偏差：

• qPCR 实验中不准确的移液会导致标准偏差升高及标准曲线制备错误
• 等位基因定量（Allele quantification）会被 DNA pooling 过程中的移液误差影响
• 线粒体 DNA 研究显示，批内结果不一致源于试剂、DNA 模板或引物的移液误差
• 重复样本之间的差异往往反映移液准确度与可重复性的差异

对于蛋白组学等分析，最终样本的检测结果来自多个涉及移液的制备步骤，每一步都会增加数据的方差与不准确性。跨实验室研究中，即使各实验室收到相同样本、使用相同方法与材料，操作者移液技术的差异仍会显著贡献于实验室间的变异。

确保吸头正确密封

操作技术的延伸还包括确保正确的吸头被稳固地安装在移液器上以获得充分密封。在免疫分析等应用中，除了良好的移液技术，还应「始终检查移液器与吸头是否正确密封，并保持一致的操作技术」。吸头密封不良会导致移液体积不准，直接影响定量结果。

自我检查与外部校准

不仅操作者技术重要，移液器的物理能力也应定期核查以确保满足目标应用的规格要求。许多组织建议采用称重法（gravimetric method）定期检查移液器与操作者的准确度和可重复性；只有经过充分培训且有经验的服务工程师才能对单支移液器进行真正准确的独立检查。

关于校准频率，不同机构建议不一。例如 FDA 的 ORA-LAB.5.5 建议机械移液器等体积计量设备至少每六个月校准一次；也有建议按照文档化程序校准，并结合周期性检查以确保持续性能。各实验室应根据实验对移液误差的敏感度及数据受损风险，评估定期检查的需求。

常见校准建议

• 至少每 6 个月进行一次外部校准（参考 FDA ORA-LAB.5.5 等要求）
• 对定量敏感的实验（qPCR、ELISA、NGS 等），建议缩短校准周期并使用专用移液器
• 使用高精度分析天平进行常规称重法核查
• 操作中始终检查吸头密封与安装是否到位
• 对高通量与重复性操作，可考虑电动移液器以降低人为误差

定期校准加上规范操作，是拿到可靠实验数据的基础。瑞宁 RAININ 移液器提供完整的校准与维护服务，需要安排校准或维护计划的话，可以联系我们的技术团队。

本文内容整理自瑞宁 RAININ《Good Pipetting Practice（GPP）— Pipetting Calibration and Technique》。